Synthese und massenspektrometrische Quantifizierung von natürlichen tRNA-Modifikationen
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Beschreibung
Der Einbau von natürlichen, modifizierten RNA-Nukleosiden in die unterschiedlichen RNA-Formen ist ein Weg, die biologischen Prozesse der Translation und Transkription möglichst fehlerfrei und effizient zu gestalten. Mittlerweile sind 109 solcher RNA-Modifikationen bekannt, wovon die meisten in der tRNA vorkommen. Um die Rolle solch natürlicher tRNA-Modifikationen im Translationsprozess genauer zu verstehen, wurde eine HPLC-MS basierende Quantifizierungsmethode entwickelt. Mit Hilfe dieser Methode wurden Gesamt-tRNA-Extrakte aus Hefezellen und Pflanzen isoliert und auf ihren quantitativen Modifikationsgehalt untersucht. Die Basis dieser Quantifizierungsmethode ist das Vorhandensein von isotopenmarkierten Analoga natürlicher tRNA-Modifikationen, von welchen repräsentative Vertreter dargestellt wurden. In dieser Arbeit ist die Ausarbeitung einer wesentlich verbesserten Synthese der Hypermodifikationen Wybutosin und Hydroxywybutosin, sowie deren isotopengelabelten Derivate beschrieben.
Der Einbau von natürlichen, modifizierten RNA-Nukleosiden in die unterschiedlichen RNA-Formen ist ein Weg, die biologischen Prozesse der Translation und Transkription möglichst fehlerfrei und effizient zu gestalten. Mittlerweile sind 109 solcher RNA-Modifikationen bekannt, wovon die meisten in der tRNA vorkommen. Um die Rolle solch natürlicher tRNA-Modifikationen im Translationsprozess genauer zu verstehen, wurde eine HPLC-MS basierende Quantifizierungsmethode entwickelt. Mit Hilfe dieser Methode wurden Gesamt-tRNA-Extrakte aus Hefezellen und Pflanzen isoliert und auf ihren quantitativen Modifikationsgehalt untersucht. Die Basis dieser Quantifizierungsmethode ist das Vorhandensein von isotopenmarkierten Analoga natürlicher tRNA-Modifikationen, von welchen repräsentative Vertreter dargestellt wurden. In dieser Arbeit ist die Ausarbeitung einer wesentlich verbesserten Synthese der Hypermodifikationen Wybutosin und Hydroxywybutosin, sowie deren isotopengelabelten Derivate beschrieben.
Autor*in
Antje Hienzsch